Основне технике агарозне гел електрофорезе(2)

Припрема узорка иЛоадинг

Због употребе континуираног пуферског система без гела за слагање у већини случајева, узорци треба да имају одговарајућу концентрацију и малу запремину. Користите апипетада полако додају узорак, са 5-10 μг по бунарчићу, да би се избегло значајно смањење резолуције. Кадаучитавање узорка, напајање мора бити искључено. Узорак треба да садржи индикаторску боју (0,025% бромофенол плава или наранџаста) и сахарозу (10-15%) или глицерол (5-10%) да би се повећала његова густина, концентрисао узорак и спречила дифузија. Међутим, понекад сахароза или глицерол могу изазвати траке у облику слова У у резултатима електрофорезе, што се може избећи употребом 2,5% Фицолл-а (поливинилпиролидон).

Електрофореза

Напон за електрофорезу је 5-15 В/цм, углавном око 10 В/цм. За раздвајање великих молекула, напон треба да буде нижи, обично не већи од 5 В/цм.

Бојење

Флуоресцентна боја етидијум бромид (ЕБ) се обично користи за бојење за посматрање ДНК трака у агарозном гелу. ЕБ може да се убаци између парова база молекула ДНК, узрокујући да се ЕБ везује за ДНК. Апсорпција ултраљубичасте светлости од 260 нм од стране ДНК се преноси на ЕБ, а везани ЕБ емитује флуоресценцију на 590 нм у црвено-наранџастој области спектра видљиве светлости. Бојење гела у раствору МгСО4 од 1 ммол/Л током 1 сата може смањити позадинску флуоресценцију узроковану невезаним ЕБ, олакшавајући детекцију малих количина ДНК.

ЕБ боја има неколико предности: једноставна је за употребу, не разбија нуклеинске киселине, има високу осетљивост и може да обоји и ДНК и РНК. ЕБ се може додати узорку и пратити коришћењем УВ апсорпције у било ком тренутку. После бојења, ЕБ се може уклонити екстракцијом са н-бутанолом.

Међутим, ЕБ боја је моћан мутаген и током руковања треба предузети мере предострожности, као што је ношење полиетиленских рукавица. Акридин наранџаста је такође често коришћена боја јер може разликовати једноланчане и дволанчане нуклеинске киселине (ДНК, РНК). Показује зелену флуоресценцију (530 нм) за дволанчане нуклеинске киселине и црвену флуоресценцију (640 нм) за једноланчане нуклеинске киселине. Поред тога, друге боје као што су метилен плаво, метилен зелено и кинолин Б могу се користити за бојење.

Пекинг Лиуии Биотецхнологи Цо. Лтд (Лиуии Биотецхнологи) је специјализован за производњу инструмената за електрофорезу више од 50 година са сопственим професионалним техничким тимом и центром за истраживање и развој. Имамо поуздану и комплетну производну линију од дизајна до инспекције, складиште, као и маркетиншку подршку. Наши главни производи су ћелија за електрофорезу (резервоар/комора), напајање за електрофорезу, плави ЛЕД трансилуминатор, УВ трансилуминатор, систем за анализу гела и слике итд.

Сада тражимо партнере, и ОЕМ резервоар за електрофорезу и дистрибутери су добродошли.

Ако имате било какав план куповине за наше производе, не устручавајте се да нас контактирате. Можете нам послати поруку на е-маил[е-маил заштићен]или[е-маил заштићен], или нас позовите на +86 15810650221 или додајте Вхатсапп +86 15810650221 или Вецхат: 15810650221.

Скенирајте КР код да бисте га додали на Вхатсапп или ВеЦхат.