Шта је електрофореза у полиакриламидном гелу?

Полиакриламид гел електрофореза

Гел електрофореза је основна техника у лабораторијама широм биолошких дисциплина, омогућавајући одвајање макромолекула као што су ДНК, РНК и протеини. Различити медијуми и механизми за раздвајање омогућавају да се подскупови ових молекула ефикасније одвајају коришћењем њихових физичких карактеристика. Посебно за протеине, електрофореза на полиакриламидном гелу (ПАГЕ) је често техника избора.

ПАГЕ је техника која раздваја макромолекуле као што су протеини на основу њихове електрофоретске покретљивости, односно способности аналита да се крећу ка електроди супротног наелектрисања. У ПАГЕ, ово је одређено наелектрисањем, величином (молекулском тежином) и обликом молекула. Аналити се крећу кроз поре формиране у полиакриламидном гелу. За разлику од ДНК и РНК, протеини варирају у зависности од уграђених аминокиселина, што може утицати на њихов рад. Низови аминокиселина могу такође формирати секундарне структуре које утичу на њихову привидну величину и последично на то како су у стању да се крећу кроз поре. Стога понекад може бити пожељно да се протеини денатуришу пре електрофорезе да би се линеаризовали ако је потребна прецизнија процена величине.

СДС ПАГЕ

Електрофореза на натријум-додецил сулфату у полиакриламидном гелу је техника која се користи за одвајање протеинских молекула масе од 5 до 250 кДа. Протеини се раздвајају искључиво на основу њихове молекуларне тежине. Натријум додецил сулфат, ањонски сурфактант, додаје се у припреми гелова који маскира унутрашње наелектрисање узорака протеина и даје им сличан однос наелектрисања и масе. Једноставним речима, денатурише протеине и даје им негативан набој.

Нативе ПАГЕ

Нативе ПАГЕ је техника која користи неденатурисане гелове за одвајање протеина. За разлику од СДС ПАГЕ, у припреми гелова се не додаје денатурант. Као резултат тога, раздвајање протеина се одвија на основу набоја и величине протеина. У овој техници, конформација, савијање и ланци аминокиселина протеина су фактори од којих зависи раздвајање. Протеини се у овом процесу не оштећују и могу се повратити након завршетка одвајања.

Како функционише електрофореза у полиакриламидном гелу (ПАГЕ)?

Основни принцип ПАГЕ је одвајање аналита пропуштањем кроз поре полиакриламидног гела помоћу електричне струје. Да би се то постигло, мешавина акриламид-бисакриламида се полимеризује (полиакриламид) додатком амонијум персулфата (АПС). Реакција, коју катализује тетраметилетилендиамин (ТЕМЕД), формира мрежасту структуру са порама кроз које аналити могу да се крећу (слика 2). Што је већи проценат укупног акриламида укљученог у гел, то је мања величина пора, а самим тим и мањи протеини који ће моћи да прођу. Однос акриламида и бисакриламида такође утиче на величину пора, али се то често одржава константним. Мање величине пора такође смањују брзину којом мали протеини могу да се крећу кроз гел, побољшавајући њихову резолуцију и спречавајући их да брзо отичу у пуфер када се примени струја.

Опрема за електрофорезу са полиакриламидним гелом

Ћелија за гел електрофорезу (резервоар/комора)
Резервоар за гел за електрофорезу у полиакриламидном гелу (ПАГЕ) се разликује од резервоара за агарозни гел. Резервоар за агарозни гел је хоризонталан, док је ПАГЕ резервоар вертикално. Помоћу ћелије за вертикалну електрофорезу (резервоар/комора), танак гел (обично 1,0 мм или 1,5 мм) се сипа између две стаклене плоче и монтира тако да је дно гела потопљено у пуфер у једној комори, а врх је потопљен у пуфер у другој комори. Када се примени струја, мала количина пуфера мигрира кроз гел из горње коморе у доњу комору. Са јаким стезаљкама које гарантују да склоп остаје у усправном положају, опрема омогућава брзи рад гела са равномерним хлађењем што резултира различитим тракама.

Пекинг Лиуии Биотецхнологи Цо., Лтд. (Лиуии Биотецхнологи) производи низ величина ћелија за електрофорезу полиакриламидног гела (резервоара/комора). Модели ДИЦЗ-20Ц и ДИЦЗ-20Г су ћелије за вертикалну електрофорезу (резервоари/коморије) за анализу секвенцирања ДНК. Неке од ћелија за вертикалну електрофорезу (резервоари/коморије) су компатибилне са системом за упијање, као што су модели ДИЦЗ-24ДН, ДИЦЗ-25Д и ДИЦЗ-25Е компатибилни су са Вестерн Блоттинг системом моделима ДИЦЗ-40Д, ДИЦЗ-40Г и ДИЦЗ-40Ф, који се користе за пренос протеинског молекула са гела на мембрану. Након СДС-ПАГЕ електрофорезе, Вестерн Блоттинг је техника за откривање специфичног протеина у мешавини протеина. Можете одабрати ове системе за упијање према експерименталним захтевима.

Напајање за електрофорезу
Да бисте обезбедили струју за покретање гела, биће вам потребно напајање за електрофорезу. У Лиуии Биотецхнологи нудимо низ извора напајања за електрофорезу за све апликације. Модели ДИИ-12 и ДИИ-12Ц са високим стабилним напоном и струјом могу задовољити електрофорезу високог напона. Има функцију постоља, времена, ВХ и корак-по-корак апликације. Они су идеални за примену електрофорезе ИЕФ и ДНК секвенцирања. За општу примену електрофорезе протеина и ДНК, имамо моделе ДИИ-2Ц, ДИИ-6Ц, ДИИ-10 и тако даље, који су такође продајни извори напајања са ћелијама за електрофорезу (резервоари/коморије). Они се могу користити за апликације електрофорезе средњег и ниског напона, као што су школске лабораторије, болничке лабораторије и тако даље. Више модела за напајање, посетите нашу веб страницу.

Бренд Лиуии има више од 50 година историје у Кини и компанија може да обезбеди стабилне и висококвалитетне производе широм света. Кроз године развоја, вредан је вашег избора!

За више информација о нама, контактирајте нас путем е-поште[е-маил заштићен] or [е-маил заштићен].

Референце за Шта је електрофореза у полиакриламидном гелу?
1. Др Карен Стјуард Електрофореза у полиакриламидном гелу, како функционише, варијанте технике и њене примене