Експеримент за одвајање протеина у серуму електрофорезом целулозно-ацетатне мембране

Принцип

Електрофореза целулозног ацетатног филма је метода електрофорезе која користи целулозни ацетатни филм као подлогу.Појава у којој се наелектрисане честице крећу ка супротној електроди под дејством електричног поља назива се електрофореза.Пошто сваки протеин има специфичну изоелектричну тачку, ако се протеин стави у раствор са пХ нижим од његове изоелектричне тачке, протеин ће бити позитивно наелектрисан и кретати се ка негативној електроди.Напротив, креће се на позитиван пол.Пошто је брзина кретања протеинских молекула у електричном пољу повезана са њиховим наелектрисањем, обликом и величином молекула, различити протеини се могу раздвојити електрофорезом.Серум садржи различите протеине, од којих сви имају изоелектричне тачке на пХ 7,5 или мање.Када се серум стави у пуфер пХ 8,6 да би се покренула електрофореза, сви протеини серума су негативно наелектрисани и помераће се ка позитивној страни у електричном пољу.Пошто различити серумски протеини имају различито наелектрисање при истом пХ, молекуларне честице су различите величине, а самим тим и брзина миграције је различита, а раздвајају се електрофорезом.Изоелектричне тачке и молекулске тежине серумских протеина су приказане у табели испод:

Експеримент је да се раздвоје различити протеини у крвном серуму помоћу целулозног ацетата мембране (скраћено ЦАМ) као подлоге.ЦАМ је врста пенастих тоалетаeфилм са добром униформом, а дебљина је 0,1 мм-1,5 мм, која има одређену апсорпцију воде.

Материјали, инструменти и реагенси за ЦАМ електрофорезу

Узорци:здрав људски крвни серум

инструмент:напајање ДИИ-6Ц, резервоар за електрофорезу ДИЦП-38Ц, супериорно пуњење узорка ВД-9404

Реагенси

1) целулозно ацетатна мембрана 7Кс9цм

2) ПХ 8,6 барбитол пуферски раствор (јонска јачина 0,05-0,09, време је 0,06 тид.): узмите 1,84 г диетил барбитурне киселине, а затим узмите 1,03 г диетил натријум пентобарбитала, додајте мало дестиловане воде да се загреје да се раствори и направите до 1000 мл;

3) Мрља: Понцеау С 0,2г, Трихлоросирћетна 3г, додати 100мл дестиловане воде;

4) ТБС/Т или ПБС/Т: 45мл 95% етанола, 5мл глацијалне сирћетне киселине, додати 50мл дестиловане воде;

5) Раствор за чишћење: 70 мл анхидрованог етанола, 30 мл глацијалне сирћетне киселине.

Екперимент Метхоd

1) Припремите мембрану: Уроните мембрану у раствор барбитол пуфера 30 мин-8х, извадите је, уклоните додатни раствор упијајућим папиром.

2) Убацивање узорака: Разликујте грубу страну и глатку страну мембране и означите линију на удаљености од 1,5 цм од горњег краја на грубој страни.Учитајте узорке врхунским алатом за убацивање узорака на грубу страну.Напомена: Узорке треба ставити на грубу страну мембране.Након што су узорци серума потпуно продрли у мембрану, окрените мембрану, ставите грубу страну (са узорцима) лицем надоле ка резервоару, а крај са узорцима се стави у негативну електроду.

3) Електрофореза: Укључите напајање, 0,4～0,6м А/цм мембране, време рада је 30-45 мин.Након покретања електрофорезе, искључите напајање.

4) Запрљајте и очистите: Извадите мембрану из резервоара и уронитеit у раствор боје 5 минута, а затим га чистите у раствору за чишћење изнова и изнова 3-4 пута док боја позадине не постане бистра.Протеини серума треба да буду приказани на тракама, а нормално постоји пет зона, које чине горњи крај до означене линије, албумин, α1-глоулин, α2-глоулин, β-глоулин, γ-глоулин.

5) Конзервација: ставити суву електрофорезутракау раствору за чишћење 10-15 минута, а затим га извадите и залепите на чисто стакло, након што се осуши, постаће провидан филмтрака.

ЕкспериментРезултат

Ефекат раздвајања узорака серума је добар и нема феномена задржавања траке.Поновљивост резултата варира због поступака испитивања и метода експериментатора, а поновљивост је висока.

Закључак

Брзи систем детекције клиничке електрофорезе (Резервоар за електрофорезуДИЦП-38Ц,напајањеДИИ-6Ц и супериорно пуњење узорка ВД-9404) које производи нашкомпанија Беијинг Лиуии Биотецхнологи Цо., Лтдиспуњава експерименталне захтеве,ирезултати су поновљиви, једноставни и брзи, погодни заУчитиистраживања.

Пекинг ЛиуииБиотецхнологи Цо., Лтд је специјализована за производњу производа за електрофорезу за индустрију науке о животу, којаима више од 50 година историје у Кини и компанија може да обезбеди стабилне и висококвалитетне производе широм света.Кроз године развоја, вредан је вашег избора!

Сада тражимо партнере, и ОЕМ резервоар за електрофорезу и дистрибутери су добродошли.

За више информација о нама, контактирајте нас путем е-поште[е-маил заштићен]или[е-маил заштићен].