Прошле недеље смо поделили неколико разматрања у вези са коришћењем електрофорезе мембране целулозног ацетата и завршићемо ову тему данас овде за вашу референцу.
Избор Концентрација пуфера
Концентрација пуфера која се користи у електрофорези целулозног ацетата је генерално нижа од оне која се користи у електрофорези папира.Уобичајени пХ 8,6Bарбитални пуфер се обично бира у опсегу од 0,05 мол/Л до 0,09 мол/Л.Приликом избора концентрације врши се прелиминарно одређивање.На пример, ако је дужина мембранске траке између електрода у комори за електрофорезу 8-10цм, потребан је напон од 25В по центиметру дужине мембране, а јачина струје треба да буде 0,4-0,5 мА по центиметру ширине мембране.Ако се ове вредности не постигну или прекораче током електрофорезе, концентрацију пуфера треба повећати или разблажити.
Претерано ниска концентрација пуфера ће довести до брзог померања трака и повећања ширине траке.С друге стране, претерано висока концентрација пуфера ће успорити миграцију трака, што отежава разликовање одређених трака за раздвајање.
Треба напоменути да се у електрофорези целулозно-ацетатне мембране значајан део струје проводи кроз узорак, што генерише значајну количину топлоте.Понекад се одабрана концентрација пуфера може сматрати одговарајућом.Међутим, у условима повећане температуре околине или када се користи већи напон, испаравање воде услед топлоте може да се интензивира, што резултира претерано високом концентрацијом пуфера и чак исушивањем мембране.
Сампле Волуме
У електрофорези са целулозном ацетатном мембраном, количина запремине узорка је одређена различитим факторима, укључујући услове електрофорезе, својства самог узорка, методе бојења и технике детекције.Као општи принцип, што је метода детекције осетљивија, то може бити мања запремина узорка, што је повољно за одвајање.Ако је запремина узорка превелика, обрасци електрофоретског одвајања можда неће бити јасни, а бојење такође може бити дуготрајно.Међутим, када се квантитативно анализирају раздвојене обојене траке коришћењем елуционих колориметријских метода детекције, запремина узорка не би требало да буде премала, јер може резултирати нижим вредностима апсорпције за одређене компоненте, што доводи до већих грешака у израчунавању њиховог садржаја.У таквим случајевима, запремину узорка треба на одговарајући начин повећати.
Типично, запремина узорка која се додаје на сваки центиметар линије за наношење узорка креће се од 0,1 до 5 μЛ, што је еквивалентно количини узорка од 5 до 1000 μг.На пример, у рутинској анализи електрофорезе протеина у серуму, запремина узорка додата на сваки центиметар линије за наношење генерално не прелази 1 μЛ, што је еквивалентно 60 до 80 μг протеина.Међутим, када се анализирају липопротеини или гликопротеини користећи исту методу електрофорезе, запремину узорка треба на одговарајући начин повећати.
У закључку, најпогоднији волумен узорка треба изабрати на основу специфичних услова кроз серију прелиминарних експеримената.
Избор раствора за бојење
Раздвојене траке у електрофорези целулозно ацетатне мембране се обично боје пре детекције.Различите компоненте узорка захтевају различите методе бојења, а методе бојења погодне за електрофорезу мембране целулозног ацетата можда неће бити у потпуности применљиве на филтер папир.
Постоје три главна принципа за избор решења за бојењецелулозно ацетатна мембрана.Прво,Боје растворљиве у води треба да имају предност у односу на боје растворљиве у алкохолу како би се избегло скупљање мембране и деформација изазвана раствором за бојење ове последње.Након бојења, важно је испрати мембрану водом и минимизирати трајање бојења.У супротном, мембрана може постати увијена или скупљена, што би утицало на каснију детекцију.
Друго, пожељно је одабрати боје са јаким афинитетом за бојење за узорак.У електрофорези серумских протеина на целулозно ацетатној мембрани, амино црни 10Б се обично користи због његовог снажног афинитета за бојење за различите компоненте серумских протеина и његове стабилности.
Треће, треба изабрати поуздане квалитетне боје.Неке боје, иако имају исто име, могу садржати нечистоће које резултирају посебно тамном позадином након бојења.Ово чак може замаглити првобитно добро раздвојене траке, што их чини тешким за разликовање.
На крају, важан је избор концентрације раствора за бојење.Теоретски, може изгледати да би већа концентрација раствора за бојење довела до темељнијег бојења компоненти узорка и бољих резултата бојења.Међутим, то није случај.Афинитет везивања између компоненти узорка и боје има одређену границу, која се не повећава са повећањем концентрације раствора за бојење.Напротив, превисока концентрација раствора за бојење не само да губи боју већ и отежава постизање јасне позадине.Штавише, када интензитет боје достигне одређену максималну вредност, крива апсорпције боје не прати линеарну везу, посебно у квантитативним мерењима. У електрофорези са целулозним ацетатом, концентрација раствора за бојење је генерално нижа од оне која се користи у електрофорези папира.
Детаљи које треба знати о биотехнологији Пекинга Лиуии's целулозно ацетатна мембранарезервоар за електрофорезу и његову примену електрофорезе, посетите овде:
лЕксперимент за одвајање протеина у серуму помоћу целулозно-ацетатне мембране
лЕлектрофореза целулозног ацетата
лНеколико разматрања треба имати на уму када користите електрофорезу целулозно-ацетатне мембране (1)
Ако имате било какав план куповине за наше производе, не устручавајте се да нас контактирате.Можете нам послати поруку на е-маил[е-маил заштићен]или[е-маил заштићен], или нас позовите на +86 15810650221 или додајте Вхатсапп +86 15810650221 или Вецхат: 15810650221.
Референца:Електрофореза (Друго издање) г. Ли
Време поста: 06.06.2023